Il est parfois curieux de se dire que l’on a réussi à voir comment de si petites molécules comme les hormones peuvent avoir autant d’effet sur le comportement humain. Mais il est encore plus incroyable de se dire que l’on arrive à les extraire du corps pour les observer, les quantifier, les analyser. Cet article servira donc à regrouper un certain nombre d’information permettant d’y voir un peu plus clair sur les méthodes employées afin d’étudier ces molécules.

Ocytocine.

Le dosage radio-immunologique ou RIA est l’étalon-or pour la détermination des niveaux d’ocytocine, alors que certaines techniques comme le dosage immunologique enzymatique ou ELISA, surtout si elles sont réalisées sans extraction des échantillons, peuvent donner des valeurs 10 à 100 fois plus élevées que celles obtenues par RIA. Ceci est probablement dû au fait que ELISA est une méthode moins spécifique et peut inclure la mesure de fragments ou de métabolites de l’ocytocine ou même d’autres matériaux qui ne sont pas liés à la molécule d’ocytocine. Les valeurs obtenues par ELISA doivent donc être interprétées avec prudence.

Références :

• Uvnäs­Moberg K, Ekström-Bergström A, Buckley S, Massarotti C, Pajalic Z, et al. (2020) Maternal plasma levels of oxytocin during breastfeeding—A systematic review. PLOS ONE 15(8): e0235806. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235806
• Szeto A, McCabe P, Nation D, Tabak B, Rossetti M, McCullough M, et al. Evaluation of enzyme immunoassay and radioimmunoassay methods for the measurement of plasma oxytocin. Psychosomatic medicine. 2011;73(5):393. pmid:21636661
• Uvnäs-Moberg K, Handlin L, Kendall-Tackett K, Petersson M. Oxytocin is a principal hormone that exerts part of its effects by active fragments. Medical Hypotheses. 2019;(109394).

Dopamine.

Les échantillons biologiques contiennent souvent un grand nombre de substances endogènes, ce qui rend la séparation et la détection des analytes cibles difficiles. Par exemple, dans le cas de la dopamine et de ses précurseurs et métabolites, ils présentent généralement de faibles concentrations et nécessitent des étapes préalables d’isolement, de purification et d’enrichissement. Par conséquent, la préparation de l’échantillon est une étape importante lors du développement de toute méthode analytique, ayant un impact significatif sur les étapes analytiques suivantes, ainsi que sur la qualité des données. Le choix de la méthode de préparation des échantillons doit tenir compte de la complexité de la matrice biologique et doit être compatible avec la méthode de détection à utiliser. La diversité des substances endogènes présentes dans les différentes matrices biologiques rend le prétraitement des échantillons complexe en raison de la nécessité de nettoyer les échantillons pour analyser uniquement les substances cibles. L’un des défis les plus importants de cette étape est la sensibilité requise pour les faibles niveaux de métabolites présents dans les matrices biologiques. les faibles niveaux de métabolites présents dans les échantillons de plasma.

Idéalement, la préparation des échantillons vise à éliminer les composés interférents endogènes et à concentrer au maximum les échantillons. Parmi les différentes méthodes, l’extraction en phase solide (SPE), la micro-extraction en phase solide (SPME), la micro-extraction par sorbant emballé (MEPS), l’extraction liquide-liquide (LLE), la précipitation des protéines (PP), la dilution, l’extraction à l’alumine et la microdialyse sont les plus utilisées dans la préparation des échantillons de plasma. Cependant, elles présentent toutes certaines limites, par exemple, le fait qu’elles soient complexes et longues, qu’elles aient une sensibilité insuffisante et de faibles rendements d’extraction. Ainsi, il est important que les procédures de nettoyage des échantillons soient standardisées et ne soient pas laborieuses ou longues.

En ce qui concerne la manipulation des échantillons, les solutions de travail sont réalisées à température ambiante et dans l’obscurité pour éviter l’oxydation des catécholamines. De plus, les échantillons de plasma utilisés pour analyser les catécholamines sont généralement conservés à l’abri de la lumière pour minimiser l’oxydation. En outre, en raison de l’instabilité thermique de ces types de composés, les échantillons ne sont décongelés qu’immédiatement avant leur utilisation.

Référence :

• Abrantes Dias, A. S., Amaral Pinto, J. C., Magalhães, M., Mendes, V. M., & Manadas, B. (2020). Analytical methods to monitor Dopamine metabolism in plasma: Moving forward with improved diagnosis and treatment of neurological disorders. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 113323. doi:10.1016/j.jpba.2020.113323

Testostérone.

Cette étude a comparé, pour la première fois, 4 procédures ID-LC-MS/MS pour la testostérone sérique à une procédure de mesure référente opérée dans un laboratoire de référence expérimenté. Pour toutes les procédures ID-LC-MS/MS, les données ont montré une qualité de performance sur toute la gamme de concentration testée, ce qui contraste fortement avec ce qui a été rapporté pour les immunoessais, qui ont révélé de graves problèmes de précision, en particulier dans la gamme de concentration de testostérone chez la femme. Il convient de noter à cet égard que des différences méthodologiques substantielles existaient entre les dosages ID-LC-MS/MS. La dilution isotopique et la spécificité de la détection dans le mode de surveillance des réactions multiples sont à l’origine de cette meilleure précision dans l’ID-LC-MS/MS par rapport à l’immunoessai.

Notre étude a montré que les procédures ID-LC-MS/MS pour la mesure de la testostérone dans le sérum ont une sensibilité analytique suffisante pour distinguer les concentrations de testostérone normogonadique, hypogonadique et féminine, une spécificité adéquate, même dans la gamme des faibles concentrations, et une assez bonne précision dans la limite de l’erreur totale dérivée biologiquement. Mais il y a aussi un inconvénient à considérer. Les améliorations apportées au LC-MS/MS en termes de facilité d’utilisation conduiront un plus grand nombre de laboratoires à développer de nouvelles procédures de mesure de la testostérone sérique. Par conséquent, il faut insister sur le fait que les nouvelles procédures de mesure doivent être validées de manière approfondie, y compris leur traçabilité à une procédure de mesure référente acceptée au niveau international et réalisée dans un laboratoire de référence compétent. En effet, la normalisation est un fondement essentiel de l’amélioration des soins aux patients. Si l’on ne reconnaît pas l’importance de cet aspect, il est probable qu’une prolifération incontrôlée des procédures de mesure de la SM vienne rapidement vicier le bon état de précision actuel que nos données indiquent être réalisable pour l’ID-LC-MS/MS. Cette conclusion est vraie pour toutes les méthodes utilisées pour la mesure de la testostérone. Par conséquent, l’exigence de normalisation devrait également être étendue aux immunodosages directs, dont les plages à rapporter devraient être limitées aux concentrations pour lesquelles la précision peut être documentée par rapport aux mesures de référence internationalement acceptées. de référence internationalement reconnues.

ID-LC : isotope dilution-liquid chromatography

MS/MS : tandem mass spectrometry

GC : gas chromatography